Взятие образцов и доставка больных рыб
Больные или подозреваемые в заболевании рыбы должны быть доставлены в ветеринарную лабораторию живыми. Для проведения исследований отбираются 10–15 особей (для старших возрастных групп — 5 рыб) на разных стадиях заболевания с ярко выраженными клиническими симптомами.
Транспортировка рыб
Транспортировку осуществляют в молочных бидонах или аналогичных ёмкостях, наполненных на ¾ объёма водой из того же водоёма, откуда была отобрана рыба, либо артезианской водой. Летом, особенно при длительных перевозках, воду с рыбой постепенно охлаждают до температуры 12–15 °C, добавляя мелко нарезанный лёд. Важно избегать резкого перепада температур между водой в источнике и транспортом, разница должна составлять не более 5–7 °C, чтобы предотвратить температурный шок у рыб.
Альтернативные методы доставки
Если невозможна доставка живой рыбы, для бактериологического исследования берутся фрагменты органов и тканей, которые помещаются в стерилизованную стеклянную тару с 40%-ным водным раствором глицерина. Ёмкость плотно закрывается крышкой, заливается парафином и отправляется с курьером.
Доставка жидкостей и мазков
Кровь, экссудаты и прочие жидкие биоматериалы отправляются в стерильно запечатанных пастеровских пипетках. Для микроскопических анализов эти же образцы отправляются в виде мазков и отпечатков («кляч-препаратов»).
Объекты для бактериальных исследований
Исследованию подлежат выделения, органы и ткани рыб, включая кровь, экссудат, содержимое абсцессов, опухолей, инфильтратов, язвы, паренхимы, содержимого кишечника, слизистые оболочки жабр и поверхности тела.
Летние бактериологические анализы проводятся не позже двух часов после отбора проб. В экстренных ситуациях допустим посев на мясопептонные среды непосредственно в хозяйстве.
Сбор материалов для вирусологии
Для вирусологических тестов отбираются кусочки поражённых органов и тканей весом не более 3–5 граммов, которые замораживаются или консервируются в 50%-ном растворе глицерина (pH 7,2–7,4) в пропорции 1:5–1:10. Материал упаковывается в стерильные флаконы, герметично закупоривается и заливается парафином.
Гистология и гистохимия
Для гистологических исследований материал берут у погибших или умерщвленных рыб. Мелкую рыбу (мальков и сеголетков) фиксируют целиком после вскрытия брюшины, а у крупной рыбы отрезают части органов размером 2×3 см и толщиной 0,5–1,0 см. Образцы вырезаются так, чтобы захватить как здоровые, так и повреждённые ткани. Отбор включают кожу с мышечной тканью, жабры, печень, почки, селезёнку, сердце, кишечник, плавательный пузырь и головной мозг. Кишечник перед фиксацией аккуратно разрезают для проникновения фиксатора внутрь. Головной мозг извлекают после вскрытия черепа. Полученные пробы погружают в широкую стеклянную банку и фиксируют 10%-ным формалином в объёме, превышающем объём образца в десять раз.
Для гистохимических исследований применяются фиксаторы типа жидкости Карнуа (составляется из абсолютного спирта, хлороформа и ледяной уксусной кислоты) или жидкости Буэна (раствор пикриновой кислоты, формалин и ледяная уксусная кислота). Выбор фиксатора определяется целью дальнейшего анализа, информация указывается на этикетке.
Забор крови
Кровь для анализа берут из сердца или хвостовой артерии. Чешуя удаляется скальпелем, слизь стирается, кожа обрабатывается 70%-ным спиртом. Кровь набирается в пастеровскую пипетку и переносится на часовое стекло. Из неё отбираются необходимые порции для гематологических исследований. Мазки крови для выявления кровяных паразитов готовятся стандартным методом, сушатся, маркируются и отправляются в лабораторию.
Биохимические исследования
Цельная кровь для биохимических тестов собирается в пробирки с добавлением лимоннокислого натрия или гепарина. Сыворотка отделяется путём естественного свёртывания крови в небольших пробирках, затем она отсасывается стерильной пипеткой и направляется в лабораторию в запаянных ампулах. Консерванты (например, борная кислота или фенол) используются для предотвращения порчи сыворотки.
Исследование паразитов
Поражённые паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие) у крупных рыб извлекаются и сохраняются в банках с этанолом или формалином. Паразиты и ткани, содержащие их, помещаются в пробирки с консервирующими растворами. В случае подозрения на протозойные инфекции, делается мазок, который фиксируется жидкостью Шаудина или смесью формалина и спирта. Гельминты предварительно промываются в физрастворе до прекращения активности. Моногенеи и трематоды фиксируются в формалине, глицерине или спиртах. Нематоды и личинки цестод хранятся в специальных фиксаторах, таких как раствор Барбагалло. Скребни фиксируются в 70%-ном спирте с предварительным высвобождением хобота. Рачки и пиявки также фиксируются формалином.
Оформление образцов
Каждый образец снабжается этикеткой с указанием вида, возраста рыбы, названия органа и деталей забора. Надписи делаются простым карандашом, этикетка размещается внутри контейнера так, чтобы её было видно. Планктон собирается планктонной сетью и изучается в живом состоянии или консервируется. Грунт для анализа отбирается дночерпателем в количестве 2 кг.
Лабораторная диагностика заболеваний рыб. Инструкции по отбору и доставке больных рыб и патологического материала для анализа
