Приемы оценки готовности производителей к нересту, в принципе, общие для всех видов рыб, однако конкретные особенности их применения зависят от видовой принадлежности и размеров особей, а также от типа рыбоводных емкостей, в которых они содержатся.
В настоящее время в рыбоводстве используют: визуальный осмотр внешних признаков производителей, анатомические методы и методы с применением современной аппаратуры.
Визуальный осмотр. При осмотре производителей на предмет их готовности к нересту необходимо снизить до минимума стрессирующие рыбу воздействия. Не следует осматривать рыб раньше наступления нерестовых температур или расчетного времени созревания (в случае применения гипофизарных инъекций) и привлекать лишних людей, не должно быть шума. В случае если осмотр при естественном освещении невозможен, свет в помещении должен гореть постоянно.
При нормально протекающем процессе овуляции у самок последовательно наблюдаются следующие признаки:
1. Брюшко при прощупывании сбоку и снизу становится мягким, слегка раздувается.
2. При пальпации полового отверстия ощущается слизь.
3. При надавливании на заднюю часть брюшка или при сгибании рыбы вбок (при удержании ее за голову и хвостовой плавник) из полового отверстия вытекает овариальная жидкость с отдельными икринками.
4. На следующем этапе созревания вместе с овариальной жидкостью вытекает икра (количество икринок может быть как очень малым, так и значительным).
5. При полной овуляции икры надавливание на заднюю часть брюшка или сгибание рыбы вызывает выделение струи икры.
Самок, дающих струю икры, отсаживают для ее отбора; рыб, дающих овариальную жидкость или отдельные икринки, просматривают через 1 час; рыб, не показывающих признаков созревания, просматривают через 2–3 часа (в случае применения гипофизарных инъекций) или через 1−2 дня (в случае выдерживания без инъекций). Схожие признаки созревания половых продуктов наблюдаются и у самцов, однако следует учитывать, что самцы многих видов рыб способны к порционному нересту. Поэтому в течение одного нерестового сезона от них можно получить несколько порций спермы.
Кроме того, необходимо помнить, что по мере созревания половых продуктов у производителей повышается двигательная активность, что также может служить сигналом к отбору половых продуктов.
Наряду с визуальной оценкой внешних признаков готовности производителей к нересту в рыбоводстве применяются анатомические методы изучения степени зрелости ооцитов рыб: биопсия, оперативный метод и прямая пальпация.
Биопсия гонад осуществляется путем введения через брюшную стенку или через боковые мышцы специального стального щупа (диаметр для карпа 2,5–3,5 мм, для русского осетра – 4,5–5,0 мм, для белуги – 5,5–6,0 мм, для севрюги, шипа и стерляди – 3–4 мм; длина канавки 3–6 см). Во избежание повреждения внутренних органов и облегчения отбора участка генеративной ткани предварительно делается прокол кожи шилом, а затем отбирается проба.
Продезинфицированный щуп вводят в заднюю треть брюшка рыбы под острым углом к оси тела на глубину 5–7 см. При повороте щупа по оси в канавке остается ткань гонады.
В США отбор образцов икринок осуществляется при помощи катетера (жесткого, тефлонового, диаметром 4,5 мм) через небольшой (6–8 мм) абдоминальный разрез.
Из пробы берут несколько ооцитов и фиксируют их в кипящей воде в течение 1−2 минут. Затем ооциты вынимают из воды, каждый из них разрезают лезвием бритвы на две равные части по продольной оси, проходящей через его анимальную и вегетативную части, и с помощью лупы определяют положение ядра (зародышевый пузырек) по отношению к оболочкам анимальной области. Если ядро находится у оболочек в зоне микропиле, то ооцит взят из яичника самки завершенной IV стадии зрелости. Если ядро отстоит менее чем на свой диаметр от оболочек, то ооцит взят из яичника самки, близкого к завершению IV стадии зрелости. Если ядро расположено на расстоянии 1,5−2 своих диаметров от оболочек, то ооцит взят из яичника самки незавершенной IV стадии зрелости. Если же ядро занимает центральное положение, то ооцит взят из яичника самки III стадии зрелости.
При биопсии производителей осетровых рыб, в качестве предварительного критерия отбора зрелых самок, рекомендуется использовать диаметр фолликулов. Например, самки, имеющие ооциты с диаметром не менее 2,6 мм (севрюга), 2,8 мм (сибирский осетр и шип), 3,2 мм (русский осетр), имеют шанс созреть через несколько месяцев.
Стадия зрелости окончательно уточняется в ходе весенней бонитировки. Можно использовать в качестве критерия для отбора зрелых самок минимальную массу ооцитов в пробе (русский осетр – 16 мг, белуга – 22 мг, севрюга – 11 мг, шип – 13 мг, стерлядь – 8 мг).
Оперативный метод близок к биопсийному. При его использовании в брюшной стенке тестируемой особи делается небольшой надрез (около 2 см), через который извлекается проба ткани гонад.
При данном способе возможен визуальный контроль типа анализируемой ткани.
Метод прямой пальпации предполагает изучение структуры гонад на ощупь путем введения пальца в тело рыбы через операционное отверстие. Данный метод широко применяется в США при выращивании осетров с целью определения пола рыб. Семенники покрыты тонкой оболочкой и на ощупь гладкие, яичники не имеют оболочки, их поверхность неровная, складчатая. Опытный рыбовод может определять пол у 300–500 рыб в день.
Недостатком выше перечисленных методов является их травматичность. Проникновение в полость тела не только может отрицательно сказаться на физиологическом состоянии рыбы, но и является сильным стрессовым фактором.
Более совершенными методами изучения гонад производителей являются методы с применением современной аппаратуры: лапароскопия, эндоскопия и ультразвуковая диагностика.
При использовании метода лапароскопии делается небольшой надрез (около 2 см) в брюшной стенке тестируемой особи и производится визуальное изучение гонад с помощью овоскопа с подсветкой.
Эндоскопия позволяет определять пол рыб и изучать гонады производителей визуально при помощи медицинского исследовательского цистоуретроскопа, применяемого в медицине для диагностики заболеваний мочеиспускательной системы, или барископа.
Зонд цистоуретроскопа вводится в полость тела рыб через прокол в брюшной стенке, как при биопсии, или через половое отверстие.
Изучение гонад осуществляется через оптико-волоконную систему аппарата. Разрешающая способность метода очень высока, поскольку через оптическую систему прибора хорошо видны мельчайшие детали строения и окраска тканей. Во избежание травмирования внутренних органов рыб при проведении эндоскопии все особи, даже небольшие, полностью обездвиживаются с помощью анестезирующих препаратов. Исследования можно проводить в небольших бассейнах. В этом случае рыбу переворачивают на спину, оставляя голову погруженной в воду.
Ультразвуковая диагностика позволяет обследовать состояние гонад рыб без какого-либо вмешательства при помощи ультразвукового сканера. Единственным недостатком данного метода является обучение специалистов.
Среди других методов оценки готовности производителей к нересту можно назвать биофизические методы интерскопии (микрорентген ооцитов, голографическая интерферометрия и др.) и экспресс методы физиолого-биохимической диагностики (определение интенсивности энергообмена, содержания белка, липидов и гемоглобина в крови рыб и т. д.).
Для повышения репродуктивного качества, увеличения плодовитости и ускорения синхронизации созревания диких самок производителей и, как следствие, более высокой оплодотворяемости икры разработан метод инъецирования производителей витаминами С (аскорбиновая кислота) и витамином Е (α-токоферол) в период преднерестового содержания.
На осетровых рыбоводных заводах для этих целей используют фармацевтические препараты: раствор 10%-й аскорбиновой кислоты (100 мг/мл) и 30%-го α-токоферола-ацетата (300 мг/мл). Наибольший эффект достигается при разовом введении витамина С (из расчета 10 мг на 1 кг тела самки) и двухнедельном курсе введения витамина Е (4-разовое инъецирование из расчета 15 мг/кг) перед нерестом.
На следующий день после инъецирования витаминов Е и С рекомендуется осуществлять инъекции цианокобаламина (витамин В12) в концентрации 500 мкг/мл, или 50 мкг на 1 кг массы тела рыбы.
Цианокобаламин наряду с улучшением рыбоводно-биологических показателей (процент оплодотворения и выживаемость потомства) способствует усилению защитных функций организма, повышению стрессоустойчивости самок осетровых рыб.
